Анализаторы аминокислот и витаминов

Анализаторы аминокислот и витаминов позволяют проводить хроматографическое разделение целевых биомолекул и их последующий анализ с помощью детекторов разных типов. Эти хроматографические системы находят широкое применение в изучении аминокислотного состава белков, нарушений аминокислотного и белкового обмена, авитаминоза и гипервитаминоза, синтезе и секвенировании пептидов, оценке качества производимых витаминов и пр.

В анализе аминокислот и витаминов обычно используют системы высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), скомпонованные из отдельных блоков: градиентных насосов на стороне высокого или низкого давления, детекторов, хроматографических колонок и реакционного модуля (в отдельных моделях).

Перед проведением аминокислотного анализа белки и пептиды расщепляют на составляющие их мономеры посредством микроволнового, жидкофазного или парофазного гидролиза с использованием соляной кислоты, фенола, протеаз и других реагентов. Однако в процессе этих обработок аминокислоты могут подвергаться частичному разрушению, окислению и дезаминированию. Поэтому возможности аминокислотных анализаторов могут ограничиваться определением только гидролитически-стойких аминокислот.

Разделяемые аминокислоты анализируют прямым электрохимическим способом (без дериватизации), либо опосредованными методами с использованием предколоночной или постколоночной дериватизации нингидрином, ортофталальдегидом (OPA) фенилизотиоцианатом (PITC), флуоренилметоксикарбонилхлоридом (FMOC).

Метод предколоночной дериватизации отличается наиболее высокой чувствительностью (для проведения одного анализа требуется от 0,5 до 1,0 мкг гидролизованного белка). Однако эту процедуру можно использовать только при условии высокой степени чистоты загружаемых образцов. Кроме того, предколоночная дериватизация нередко приводит к образованию неизвестных производных аминокислоты, что затрудняет интерпретацию результатов хроматографии.

Постколоночной дериватизации отдают предпочтение при разделении более концентрированных образцов (от 5 до 10 мкг гидролизованного белка), а также в случае их недостаточной чистоты, например, при загрязнении мочевиной, детергентами и другими компонентами солевых растворов. В настоящее время эта процедура получила наибольшее распространение в аминокислотном анализе.